2.1.6 PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

2.1.6 PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

La preparación de medios de cultivo es sencilla pero incluye la manipulación de múltiples sustancias. Esta preparación puede simplificarse mediante el uso de:

• Packs listos para usar, disponibles para medios frecuentemente utilizados. Habitualmente constan de medio base, sin reguladores.

• Elaboración de soluciones stock mas concentradas, agrupando los compuestos en varias soluciones stock, por ejemplo:

Stock 1: Macros (x10)

Stock 2: Sales de Calcio (x 10)

Stock 3: Micronutrientes (x 100)

Stock 4: Solución de hierro

Stock 5: Vitaminas (x 100)

Stock 6: Reguladores (cada uno individualmente)(x 200)

Estas soluciones stock se conservan en nevera (stock 1, 2, 3 y 4) o congelador (stock 5 y 6), según los compuestos que contengan, durante meses. Algunas soluciones deben conservarse en oscuridad.

 Algunos aspectos relevantes al preparar el medio o las soluciones stock:

• La cantidad de un compuesto a añadir, en peso, es función de su grado de hidratación. Lo relevante es mantener la molaridad del nutriente; a igual peso del compuesto, cuanto mayor grado de hidratación menor molaridad del nutriente.

• La concentración de una solución stock está limitada por la solubilidad de sus compuestos y por las interrelaciones entre ellos. La disolución de los compuestos no debe dar lugar a reacciones entre ellos que causen algún tipo de precipitación o que disminuyan su capacidad de incorporación al explanto.

• Algunos compuestos, por ejemplo muchos reguladores de crecimiento, son poco hidrosolubles. Para preparar sus soluciones stock se disuelven en una pequeña cantidad de soluciones ácidas o básicas (OHNa 1N, HCl 1N), solventes orgánicos (ej. DMSO), o etanol, teniendo siempre presente el potencial efecto (toxicidad, efecto sobre el pH, etc.) de dichos solventes.

• Los compuestos termolábiles deben ser incorporados mediante filtración al medio ya autoclavado y a temperaturas cercas a la temperatura ambiente pare evitar su degradación.

Compuestos	Degradación por el calor	Referencias
ABA	Ligera	Catálogo Sigma
Sulfato de adenina		Liau y Boll,1970
Ácido L-ascórbico		Catálogo Sigma
L-asparagina		Liau y Boll, 1970
Pantotenato cálcico	Alta	Dodds y Roberts, 1982; Catálogo Sigma
Ácido trans-cinámico		Catálogo Sigma
Cisteina		Butenko, 1964
Benziladenina ribósido		Catálogo Sigma
Cloruro de colina		Liau y Boll, 1970
Ácido fólico		Liau y Boll, 1970
Fructosa	Substancias inhibidoras	Stehsel y Caplin, 1969
Ácido geberélico	Ligera	Butenko, 1964; Watson y Haperin, 1981
L- glutamina	Alta	Liau y Boll, 1970; Thompson et al. 1977
IAA	Degradación de un 40% en 20 minutos de autoclavado	Nissen y Sutter, 1988; Catálogo Sigma
IAA-L-alanina	Ligera	Pence y Caruso, 1984; Catálogo Sigma
IAA- L-ácido aspártico	Pronunciada	Pence y Caruso, 1984; Catálogo Sigma
IAA-glicina	Ligera	Pence y Caruso, 1984; Catálogo Sigma
IAA-L-fenilalanina	Ligera	Pence y Caruso, 1984; Catálogo Sigma
IBA	Degradación de un 20% en 20 minutos de autoclavado	Nissen y Sutter, 1988; Catálogo Sigma
Kinetina	Ligera	Catálogo Sigma
Extracto de malta	Substancias inhibidoras	Solomon, 1950
Nicotinamida		Liau y Boll, 1970
Ácido nicotínico		Liau y Boll, 1970
N,N'-dimetilurea	Total	Schmitz y Skoog, 1970
Ácido pantoténico	Alta	Dodds y Roberts, 1982; Catálogo Sigma
PBA	Ligera	Catálogo Sigma
Phloridzina		Krikorian et al. 1982
Piridoxina	Ligera	Singh y Krikorian, 1981
Riboflavina		Liau y Boll, 1970; Catálogo Sigma
2-iP	Ligera	Catálogo Sigma
2-iP ribósido		Catálogo Sigma
Tiamina	Alta a pH >5.5	Linsmaier y Skoog, 1965; Liau y Boll, 1970
L-triptófano		Butenko, 1964; Catálogo Sigma
Urea		Liau y Boll, 1970; Peters y Mayne, 1974
Zeatina	Ligera	Catálogo Sigma

 http://cv.udl.cat/cursos/76304/t5/t5.htm